Prueba de rojo de metilo para averiguar la capacidad de una bacteria para utilizar glucosa (con la figura)

¡Lea este artículo para aprender sobre la prueba del rojo de metilo (prueba MR), para descubrir la capacidad de una bacteria para utilizar la glucosa con la producción de un ácido estable como producto final!

Principio:

Algunas bacterias tienen la capacidad de utilizar la glucosa y convertirla en un ácido estable como el ácido láctico, ácido acético o ácido fórmico como producto final.

Estas bacterias inicialmente metabolizan la glucosa en ácido pirúvico, que se metaboliza aún más a través de la vía de ácido mixto para producir el ácido estable.

El tipo de ácido producido difiere de una especie a otra y depende de las vías enzimáticas específicas presentes en las bacterias. El ácido así producido disminuye el pH a 4.5 o menos, lo que se indica por un cambio en el color del rojo de metilo de amarillo a rojo.

En la prueba del rojo de metilo (prueba MR), las bacterias de prueba se cultivan en un medio de caldo que contiene glucosa. Si la bacteria tiene la capacidad de utilizar glucosa con la producción de un ácido estable, el color del rojo de metilo cambia de amarillo a rojo, cuando se agrega al cultivo en caldo.

Materiales necesarios:

Tubos de ensayo, matraz cónico, tapones de algodón, bucle de inoculación, autoclave, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente, incubadora, caldo MR-VP (caldo de metka rojo-Voges Proskauer o caldo de fosfato de glucosa), solución de rojo de metilo, colonias aisladas o Culturas puras de bacterias.

Procedimiento:

1. Los ingredientes del medio de caldo MR-VP (que contiene glucosa como componente principal) o de su polvo prefabricado requerido para 100 ml del caldo se pesan y se disuelven en 100 ml de agua destilada en un matraz cónico de 250 ml agitando y agitando. girando El caldo MR-VP también se llama caldo de fosfato de glucosa (Figura 7.4).

2. Su pH se determina usando un papel de pH o un medidor de pH y se ajusta a 6.9 usando 0.1N HCI si es más o usando 0.1N NaOH si es menos. El matraz se calienta, si es necesario, para disolver los ingredientes por completo.

3. El caldo se distribuye en cinco tubos de ensayo (aproximadamente 10 ml cada uno), tapados con algodón, cubiertos con papel artesanal y atados con hilo o banda de goma.

4. Los tubos de caldo se esterilizan a 121 ° C (15 psi de presión) durante 15 minutos en un autoclave.

5. Los tubos de caldo se dejan enfriar a temperatura ambiente.

6. Las bacterias de prueba se inoculan asépticamente, preferiblemente en una cámara de flujo laminar, en el caldo con la ayuda de un bucle de inoculación esterilizado sobre una llama Bunsen. El bucle se esteriliza después de cada inoculación.

7. Los tubos de caldo inoculados se incuban a 37 ° C durante 24 a 48 horas en una incubadora.

8. Se coloca una solución alcohólica de rojo de metilo (3-4 gotas) en cada tubo de ensayo.

Observaciones:

1. Color rojo producido: MR positivo (es decir, la bacteria ha convertido la glucosa en un ácido estable, según lo indicado por la conversión de rojo de metilo de color amarillo a rojo. Indica una fermentación ácida mixta).

2. Color rojo no producido: MR negativo (es decir, la glucosa en el medio no se ha convertido en un ácido estable. Esto indica que se trata de una fermentación con butilenglicol).