Usos clínicos del citómetro de flujo
Usos clínicos del citómetro de flujo!
1. Enumeración de diferentes células (como las células T y las células B).
2. Detección de antígenos de células B y clasificación de neoplasias hematopoyéticas (leucemias y linfomas).
3. Detección de antígenos en la superficie de las células mieloides, que es útil en el diagnóstico de síndromes mielodisplásicos y leucemia mieloide.
4. Las moléculas CD34 se expresan en la superficie de las células progenitoras hematopoyéticas. Las células madre aisladas de la médula ósea o la sangre periférica se enumeran mediante el uso de mAbs marcados en CD34, de modo que el número exacto de células madre se pueda calcular y transfundir a un paciente. Las células madre restantes se almacenan en nitrógeno líquido y pueden transferirse posteriormente al mismo paciente, si es necesario.
5. Fenotipado con HLA Los mAbs marcados con Fluor Chrome para cada antígeno HLA se utilizan para unirse con los antígenos de clase I y clase II del MHC en la superficie de las células. Las células coloreadas se analizan posteriormente (a medida que las células pasan como una sola columna) en el citómetro de flujo.
6. Detección de antígenos intracelulares.
Las células se tratan primero con agentes que hacen que la célula sea permeable, sin romper completamente la célula.
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Luego, las células se tratan con conservantes suaves para reticular las proteínas citoplasmáticas en su lugar y evitar que se escapen de la célula.
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Luego, las células se tratan con mAbs marcados dirigidos contra antígenos intracelulares. Los mAb marcados entran en las células y se unen con los antígenos intracelulares.
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Las células se pasan a través del citómetro de flujo para evaluar las células teñidas.
yo. La detección de la desoxinucleótido transferasa terminal intracelular (TdT) ayuda a definir los tumores malignos tempranos de las células B. TdT es una enzima expresada durante el reordenamiento del gen de inmunoglobulina que es responsable de la adición de nucleótidos aleatorios en las uniones de los segmentos de inmunoglobulina. Por lo tanto, la expresión de TdT en una población de células B malignas indica un fenotipo de células B muy inmaduro.
ii. La detección de mieloperoxidasa intracelular ayuda en la clasificación de varios subtipos de leucemia mieloide.
7. Análisis del contenido de ADN de las células. El citómetro de flujo puede evaluar la cantidad de material genético en una célula y determinar la fracción de la fase S o la cantidad de aneuploidía en una población de células, a. Ploidia del ADN Las células normales que contienen dos copias del cromosoma se denominan células diploides.
Todas las células (excepto óvulos y espermatozoides) que no son diploides se consideran aneuploides y pueden servir como un indicador confiable de neoplasia. Un gran número de células en un tumor tienen una cantidad aberrante de ADN. El análisis del ADN mediante citometría de flujo se realiza mediante la incubación de células permeabilizadas con tintes fluorescentes (como el yoduro de propidio).
El tinte se intercala en el ADN y emite fluorescencia. La cantidad de fluorescencia es directamente proporcional al contenido de ADN de la célula. La efectividad de la quimioterapia para la malignidad en un paciente puede evaluarse mediante el análisis de ploidía. El análisis de ploidia determina la cantidad total de ADN nuclear en células tumorales individuales. El índice de ADN es la proporción de fluorescencia del ADN de la célula tumoral a la fluorescencia del ADN de la célula normal. El índice de ADN de la célula diploide normal es 1. El índice de ADN de más o menos de 1 indica un tumor aneuploide.
segundo. Análisis del ciclo celular del ADN:
El contenido de ADN de las células en varias fases del ciclo celular durante la replicación (es decir, fase de síntesis de fase previa de Gq / Gj; síntesis de fase S de ADN; fase de síntesis de fase G2 / M posterior a la de ADN) se puede medir para evaluar el crecimiento celular y agresividad del cáncer. Más ADN es sintetizado por células cancerosas agresivas. Las células que atraviesan la fase S muestran una síntesis de ADN que es directamente proporcional a su agresividad.
8. Muchos análisis funcionales de leucocitos se pueden realizar con un citómetro de flujo.
yo. Producción de O 2 - (superóxido) como un ensayo para la enfermedad granulomatosa crónica.
9. Detección de la viabilidad celular:
El tinte propodium yoduro entra en las células que tienen membranas rotas y una estructura nuclear rota. Por lo tanto, con el yoduro de propidio, las células muertas emitirán fluorescencia mientras que las células vivas no emitirán fluorescencia. Además, la fluorescencia del yoduro de propidio se encuentra en la parte más roja del espectro. Por lo tanto, este método se puede combinar con la tinción de mAb regular, en donde las células muertas se tiñen de rojo y, por lo tanto, se pueden omitir del análisis de datos.
10. Los métodos de citometría de flujo para detectar células que se someten a apoptosis también están disponibles.
