Notas útiles sobre la enzima papaína y la enzima pepsina.
Las inmunoglobulinas son proteínas y generalmente son resistentes a la digestión por las enzimas.
Sin embargo, la enzima papaína y la pepsina escinden las moléculas de inmunoglobulina. Los fragmentos generados por la papaína y la pepsina son útiles para estudios sobre la estructura y las funciones de la inmunoglobulina. Pero los sitios de escisión de estas dos enzimas son diferentes (Figura 9.5).
Fig. 9.5: Diagrama esquemático de la fragmentación proteolítica de la inmunoglobulina mediante tratamiento breve con enzimas papaína y pepsina.
La enzima papaína escinde la inmunoglobulina en el lado N-terminal del enlace disulfuro de la cadena inter-pesada y produce tres fragmentos (dos fragmentos Fab y un fragmento Fc). La enzima pepsina escinde la inmunoglobulina en la región C-terminal y produce un fragmento grande (que contiene dos regiones Fab) llamado F (ab ') 2 . Las cadenas pesadas restantes en el lado C-terminal se digieren en múltiples péptidos pequeños
1. papa de la enzima:
La papa de la enzima corta la región de la bisagra en el lado N-terminal de los disulfuros de la cadena inter-pesada y esto resulta en la formación de tres fragmentos. (Dos fragmentos que contienen la región variable y un fragmento que contiene las regiones C H 2 y C H 3). Los dos fragmentos que contienen la región variable son llamados; Los fragmentos Fab (es decir, la unión del antígeno del fragmento) ya que tienen los sitios de unión al antígeno.
El tercer fragmento comprende las porciones carboxilo-terminales de ambas cadenas pesadas mantenidas juntas por disulfuros. En general, la estructura del tercer fragmento es idéntica para muchas moléculas de inmunoglobulina diferentes.
Por lo tanto, los fragmentos de estos tipos pueden cristalizarse incluso si consisten en muchas inmunoglobulinas diferentes. Entonces, este fragmento se llama fragmento cristalizable o fragmento Fc. La mayoría de las propiedades biológicas secundarias de las inmunoglobulinas dependen de las secuencias en la región Fc. También esta es la región reconocida por los receptores Fc en muchos tipos de células.
2. Enzima Pepsina:
La enzima pepsina escinde la inmunoglobulina en el lado carboxi-terminal de la región bisagra, lo que da como resultado un fragmento grande llamado F (ab ') 2 . El F (ab ') 2 tiene dos fragmentos Fab unidos por enlaces disulfuro. La región Fc está ampliamente degradada por la pepsina, y generalmente no queda ningún fragmento Fc intacto después de la digestión con pepsina.
