Notas útiles sobre los ensayos de activación de linfocitos

Las capacidades funcionales de los linfocitos en respuesta a antígenos o mitógenos se determinan mediante ensayos de activación de linfocitos.

Por lo tanto, los ensayos de activación de linfocitos son más apropiados para evaluar la inmunocompetencia del individuo que una simple enumeración de linfocitos.

Hay dos tipos de ensayos de activación de linfocitos:

yo. Detección de 'marcadores de activación' en la superficie de los linfocitos.

ii. Evaluación de la capacidad de los linfocitos para proliferar después de la estimulación de células T.

Los estímulos de células T más comúnmente utilizados para evaluar la proliferación de linfocitos T son:

yo. Lectinas [como la fitohemaglutinina (PHA) y la concanavalina A (ConA)

ii. Toxinas bacterianas que actúan como super antígenos.

iii. Compuestos químicos [tales como acetato de miristato de forbal (PMA), ionóforos de calcio

iv. Citocinas

v. mAbs para receptores de superficie (especialmente moléculas de CD3 en células T)

La activación de las células B es inducida por:

yo. Mitógeno Pokeweed (PWM). PWM también activa las células T

ii. Superantigenos

iii. Lipopolisacáridos

iv. mAbs que entrecruzan slgs en la superficie de las células B.

a. Los linfocitos purificados se cultivan en pocillos de microtitulación de 96 pocillos y se estimulan con antígeno o mitógeno (generalmente durante 48 horas).

↓

Se agrega timidina tritiada ( ³ H-Tdr) a los pocillos y se incuba

↓

El contenido de los pocillos se succiona y se filtra en los filtros y se mide la cantidad de ³ H Tdr en el papel de filtro. La incorporación de ³ H-Tdr en el ADN cromosómico refleja la proliferación celular.

segundo. Existen ensayos no radioactivos para determinar la proliferación de células. Estos ensayos utilizan tintes fluorescentes que se incorporan en el ADN o tintes que miden la respiración oxidativa, como el MTT.

do. La bromodeoxiuridina (BrdU) se incorpora al ADN de células altamente replicantes y, por lo tanto, se puede usar para evaluar la proliferación celular. El BrdU incorporado en las células se detecta utilizando mAbs contra BrdU y citometría de flujo (como la detección de antígenos intracelulares mediante citometría de flujo).

BrdU también puede administrarse a pacientes con cáncer in vivo y posteriormente el tumor puede resecarse y las células tumorales pueden evaluarse para la incorporación de BrdU. Este ensayo proporciona una idea sobre la fracción proliferativa de células tumorales en un paciente.

re. La activación de las células T citotóxicas se analiza mediante un ensayo de liberación de cromo ⁵¹ :

Las células diana se marcan con cromo radiactivo ( ⁵¹ Cr), que se une a las proteínas intracelulares de las células diana.

↓

Las células diana marcadas se incuban con células T citotóxicas.

↓

La lisis de las células diana por parte de las células T citolíticas da como resultado la liberación de ⁵¹ Cr.

Las células se centrifugan y se mide el ⁵¹ Cr liberado en el sobrenadante. La cantidad de ⁵¹ Cr liberada es proporcional a la lisis de las células.