Prueba de hidrólisis lipídica en bacterias para determinar su capacidad para hidrolizar los lípidos (con la figura)

Lea este artículo para aprender sobre la prueba de hidrólisis de lípidos, para descubrir la capacidad de una bacteria para hidrolizar los lípidos (grasas).

Principio:

Algunas bacterias tienen la capacidad de hidrolizar los lípidos (grasas) a glicerol y ácidos grasos, ya que poseen la enzima lipolítica "lipasa".

Estas bacterias se llaman bacterias lipolíticas. Mientras que los lípidos forman una emulsión, cuando se dispensan en agar, producen opacidad, sus productos finales hidrolizados, glicerol y ácidos grasos, no forman dicha emulsión con agar, por lo que no producen dicha opacidad; más bien producir transparencia.

En la prueba de hidrólisis lipídica, las bacterias de prueba se cultivan en placas de agar que contienen tributirina como sustrato lipídico. La tributirina forma una emulsión, cuando se dispensa en el agar, produciendo un medio opaco.

Si la bacteria tiene la capacidad de hidrolizar los lípidos, sus colonias hidrolizan la tributirina en el medio en las áreas circundantes a glicerol soluble y ácidos grasos (ácido butírico), mientras que el resto de las áreas de las placas contienen tributirina no hidrolizada.

Como resultado, se forman zonas transparentes transparentes alrededor de las colonias, ya que los productos hidrolizados, glicerol y ácidos grasos formados alrededor de ellas no forman emulsión con el agar. Por otro lado, el resto de las áreas de las placas permanecen opacas, ya que la tributirina no hidrolizada en estas áreas forma una emulsión con el agar.

Materiales necesarios:

Placas de Petri, matraz cónico, tapones de algodón, bucle de inoculación, autoclave, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente de eliminación, incubadora, agar con tributirina, colonias aisladas o cultivos puros de bacterias.

Procedimiento:

1. Se limpian dos placas de petri, se cubren con papel artesanal y se atan con hilo o banda de goma (Figura 7.22). Este paso, así como la esterilización de las placas de Petri en el paso 6, se omiten si las placas de Petri esterilizadas en horno se usan directamente.

2. Los ingredientes del medio de agar con tributirina (excluyendo la tributirina, que es el componente lipídico) o su polvo preparado requerido para 100 ml del medio se pesan y se disuelven en 100 ml de agua destilada en un matraz cónico de 250 ml con agitación y girando

3. Su pH se determina usando un papel de pH o un medidor de pH y se ajusta a 7.2 usando 0.1N HCI si es más o usando 0.1N NaOH si es menos.

4. El matraz se calienta para disolver el agar en el medio completamente.

5. Después de enfriar a aproximadamente 90 ° C, se agrega tributirina y se emulsiona en un mezclador Warring.

6. El matraz está tapado con algodón, cubierto con papel artesanal y atado con hilo o banda de goma.

7. Las dos placas de Petri y el matraz cónico que contiene medio de agar con tributirina se esterilizan a 121 ° C (presión de 15 psi) durante 15 minutos en un autoclave.

8. Después de la esterilización, se retiran del autoclave y se dejan enfriar durante algún tiempo, sin dejar que el medio se solidifique. El enfriamiento del medio evita la condensación y la acumulación de gotas de agua dentro de las placas. Si el medio ya ha sido preparado y solidificado durante el almacenamiento, debe licuarse calentándolo cuidadosamente hasta que se derrita por completo.

9. Para preparar las placas de agar con tributirina, antes de que el medio de agar con tributirina esterilizado se enfríe y solidifique, en estado fundido caliente, se vierte asépticamente, preferiblemente dentro de una cámara de flujo laminar, en las dos placas petri esterilizadas (aproximadamente 20 ml cada una), de modo que El medio fundido cubre completamente el fondo de las placas de Petri.

Luego, las placas se cubren con sus tapas y se dejan enfriar, para solidificar el medio en ellas. La tributirina forma una emulsión, cuando se dispensa en agar, produciendo un medio opaco. El vapor de agua que puede condensarse en la superficie interna de las placas y tapas se evapora manteniendo las placas y las tapas en posición invertida en una incubadora a 37 ° C durante aproximadamente 1 hora.

10. Cada placa está marcada en el lado inferior en cuatro cuartos.

11. La "inoculación puntual" de las bacterias de prueba se realiza de forma aséptica, preferiblemente dentro de una cámara de flujo laminar, en el centro de cada cuarto haciendo una mancha (o una pequeña muestra) de las bacterias con la ayuda de un bucle esterilizado por llama. El bucle se esteriliza después de cada inoculación.

12. Las placas inoculadas se incuban en posición invertida, de arriba abajo, a 37 ° C durante 24 a 48 horas en una incubadora hasta que las colonias de la bacteria son visibles.