Experimento para realizar la tinción básica de bacterias para observar su forma, tamaño y disposición

Pretende realizar una tinción básica simple de bacterias, observar su forma, tamaño y disposición.

Propósito:

No es posible observar la forma natural, el tamaño y la disposición de las bacterias mediante tinción básica, ya que estas características están distorsionadas por la fijación por calor.

Además, algunas bacterias (por ejemplo, espirilos) son difíciles de teñir.

Por lo tanto, la tinción negativa se realiza por dos razones de la siguiente manera:

(una) Para observar la forma natural, el tamaño y la disposición de las bacterias, ya que aquí no se realiza la fijación por calor.

(segundo) Para observar esas bacterias, ¿cuáles son difíciles de teñir?

Principio:

Las células bacterianas llevan carga negativa en su superficie, debido a que están rodeadas por cationes, como Na ⁺ y K ⁺ (Figura 5.9). En la tinción ácida, se usa una tinción ácida, que se ioniza en un cromógeno aniónico (ion colorante cargado negativamente) y un catión.

Los cromógenos cargados negativamente son repelidos por las cargas negativas de la superficie en las células bacterianas, debido a que el tinte no puede penetrar en la célula. Ahora, las células sin teñir son fácilmente discernibles contra el fondo coloreado.

Materiales necesarios:

Portaobjetos, asa, tinción ácida (eosina / nigrosina), caldo / placa / cultivo inclinado de bacterias, microscopio, aceite de inmersión.

Procedimiento:

1. Una diapositiva se limpia adecuadamente debajo del agua del grifo, de manera que el agua no quede como gotas en su superficie (Figura 5.10).

2. El agua adherida se limpia con papel absorbente y el portaobjetos se seca al aire.

3. Una pequeña gota de la tinción ácida (nigrosina / eosina) se coloca cerca de un extremo de la diapositiva.

4. Un asa se esteriliza sobre llama y se enfría. De manera aséptica, se transfiere a la gota de la mancha un asa de bacterias de la placa de agar o inclinada o un asa de suspensión de bacterias de un caldo líquido. Se hace una suspensión de bacterias en la mancha mezclando suavemente el bucle de bacterias en la gota de la mancha, de tal manera que, la gota no se propague.

5. Otra diapositiva limpia se mantiene en un ángulo de 30 ° con respecto a la primera diapositiva, de tal manera que, un borde estrecho de la anterior toque la superficie de la posterior hacia el final sin que caiga la mancha.

6. En esa posición inclinada, la segunda diapositiva se arrastra hacia la gota de la mancha, hasta que su borde solo toca la gota y la gota se extiende a lo largo de su borde.

7. En esa posición inclinada, la segunda diapositiva se empuja hacia atrás para formar un frotis delgado de bacterias.

8. El frotis se seca al aire. La fijación de calor no se hace aquí.

9. La diapositiva se sujeta a la etapa del microscopio y el frotis se observa bajo objetivos de baja potencia y alto seco.

10. Se coloca una gota de aceite de inmersión en la muestra.

11. El frotis se observa bajo el objetivo de inmersión en aceite.