Crioconservación de gametos en peces.
En este artículo discutiremos sobre la crioconservación de gametos en peces.
La crioconservación es una técnica de almacenamiento prácticamente sin límites de tiempo. La preservación de gametos de peces ha sido probada con esta técnica. La crioconservación de espermatozoides es un procedimiento bien establecido en la cría de animales.
Ahora los espermatozoides criopreservados se utilizan con éxito en la inseminación de la cría de ganado, caballos, cerdos, ovejas y aves. Es interesante observar que se han realizado grandes esfuerzos para transferir esta tecnología a la conservación de espermatozoides, óvulos y embriones de peces.
Esta técnica ayudará a los criadores de peces de las siguientes maneras:
(1) El problema de la maduración no coincidencia de machos y hembras puede superarse si se almacenan los espermatozoides u óvulos.
(2) Se puede llevar a cabo el programa de reproducción selectiva que mejorará el stock indígena y ayudará al tercer mundo a criar a sus especies indígenas y a producir cepas especiales de tallos superiores.
(3) La técnica de crioconservación de gametos jugará un papel importante en la conservación del germoplasma indígena, ya que muchos de los peces indígenas de la India no pueden competir con los peces exóticos. Mediante esta técnica, los gametos de especies amenazadas se acumulan como una cobertura contra la disminución de la variabilidad genética causada por alteraciones ambientales.
(4) Puede ayudar en la producción de la cultura mono-sexual.
(5) Si los gametos se pueden preservar con éxito, podemos desarrollar peces durante todo el año según nuestro requisito y podemos ayudar a establecer un banco de genes para preservar la originalidad genética de la población y mantenerlos disponibles para la reintroducción cuando las condiciones generales de supervivencia hayan mejorado.
Los espermatozoides, los óvulos y los embriones pueden ser crioconservados, pero la conservación de los óvulos y los embriones es difícil debido a la falta de disponibilidad del crioprotector para ser absorbido suficientemente en estas células debido a su gran tamaño en comparación con los espermatozoides.
La crioconservación de espermatozoides en peces es exitosa en el hombre; especies Estas especies son Oncorhynchus, Salmo, Salvilinus fontinalis, Hucho hucho, Thymallus thymallus, Esox lucius y Cyprinus carpio, Serothodon mossambicus; Labeo rohita, Catla catla y Cirrhinus mrigala.
Se deben seguir los siguientes pasos para preservar los espermatozoides:
(1) Recolección de leche (semen).
(2) Preparación de la solución diluyente.
(3) Selección de crioprotector.
(4) Congelación.
(5) Éxito en la fertilización.
Colección de Milt:
El primer paso es recoger los espermatozoides. Normalmente, los espermatozoides se recolectan de peces sanos mediante un método de extracción. Se puede utilizar el catéter, que es mejor alternativa a la extracción. Las criadoras masculinas con mejores características características se seleccionaron y lavaron con solución de Ringer y la región de las papilas genitales se secó.
La criadora puede ser anestesiada o no anestesiada. La anestesia generalmente utilizada es de 0, 3 ml / l de fenoxietanol. Según Kumar (1989), una inyección de suston 250 (organon) antes de pelar da un mejor resultado en las carpas indias. La mayoría de los trabajadores en este campo recomendó que los peces no anestesiados se despojaran para obtener la leche.
La leche se recoge en jeringas o tubos de hemólisis y luego se conserva en ampollas de vidrio (selladas o no), pajitas de plástico y, a menudo, en bolsas de plástico. El color, volumen, densidad, pH y motilidad de los espermatozoides deben ser notados.
La muestra debe estar libre de materia urinaria y fecal. Se examinará un frotis de la muestra al microscopio para detectar anomalías en los espermatozoides. Si la muestra está bien, póngala para un procesamiento posterior, de lo contrario, se puede tomar una muestra nueva de las nuevas criadoras.
Durante el período de recolección y conservación de los espermatozoides, la jeringa / ampollas / paja se puede mantener en el agua del estanque para mantener la temperatura constante. Legendary y Billard (1980) recolectaron espermas en tubos de hemólisis en hielo derretido y luego se almacenaron en una superficie refrigerada a 4 ° C.
La preparación y selección del extensor, una solución en la cual se recolecta la leche, es más crítica para la crioconservación. El extensor previene el agotamiento de la energía de los espermatozoides y los mantiene en condiciones normales pero vivas.
Hay dos extensores básicos. Se llaman medio Mounibs (M) y medio Menezo (Me). En estos dos medios se añaden serun albúmina bovina (BSA) y yema de huevo de telurito. Para los peces indios, se probaron varios extensores modificando en sus siguientes constituyentes.
Los constituyentes comunes son cloruro de sodio, KCl, CaCl2, NaHCO3, Na2HPO4 y MgSO4. Además de estos, también se agregan nutrientes y glicina para mejorar la crioconservación. También se agregan antibióticos como gentomycin o streptomycin a la solución de extensión si es necesario.
Crioprotector
La función principal del crioprotector es penetrar en la célula y puede ayudar a los espermatozoides a tolerar la temperatura de congelación. El más importante y utilizado ampliamente es DSMO (dimetilsulfóxido) y glicerol. Harvey (1983) utilizó metanol, DSMO y glicerol en combinación con leche en polvo o yema de huevo.
La solución crioprotectora y diluyente en una proporción fija, generalmente una parte de crioprotector y nueve partes de solución diluyente se conoce como diluyente. En este diluyente, los espermatozoides se recolectan para su posterior procesamiento para la congelación.
El diluyente (crioprotector + extensor + espermatozoides) se toma con pajitas de polivinilo y ambos extremos de las pajitas están sellados y ahora están listos para congelarse o enfriarse. La lechada se puede enfriar, la temperatura se mantiene entre 0-5 ° C. Mientras que en la congelación, se utilizan CO2 y nitrógeno líquido. El almacenamiento refrigerado de la teleóstea de la lechuga (0-50 ° C) se ha estudiado ampliamente en salmónidos.
En el procedimiento de congelación, se deben controlar muchos problemas, como el shock por frío, la formación de hielo intracelular y el shock osmótico. La crioconservación generalmente significa el almacenamiento de células o tejido a -196 ° C, la temperatura del nitrógeno líquido (Fig. 22.1).
La lesión celular debe ser controlada. Generalmente se producen tres tipos de lesión celular. El primero es el choque frío, que es causado por el enfriamiento por encima de las temperaturas de congelación. Esto es más importante para los óvulos, no muy importante para los espermatozoides.
Esto ocurre hasta 0 ° C. Cuando la temperatura oscila entre 0 ° C y -80 ° C, se produce el choque osmótico y la formación de hielo intracelular en óvulos y espermatozoides. Para la crioconservación exitosa estas cosas están controladas.
En resumen, las pajitas que contienen diluyente, se transfieren a botes. Los botes que sostienen las pajitas después de permitir un período de equilibrio variable se sumergen primero en vapores de nitrógeno líquido y luego en nitrógeno líquido a una temperatura de -196 ° C. Legendra y Billard (1980) almacenaron los espermatozoides de las truchas arco iris en hielo seco (CO 2 sólido -79 ° C) o en nitrógeno líquido hasta 6 meses.
En varias especies de agua dulce, la congelación se ha llevado a cabo mediante la granulación de espermas en hielo seco. La transición de 0 ° C a -70 ° C dura aproximadamente 2 minutos, lo que da como resultado una velocidad de 35 o C / min. Dado que la tasa disminuye por encima de - 60 ° C. Los mejores resultados se obtienen en nitrógeno líquido.
Deshielo
El deshielo es un evento inverso de congelación. La descongelación se realiza en baño de agua a temperaturas entre 10 ° C y 60 ° C. El éxito de todo el procedimiento depende de la motilidad de los espermatozoides y la capacidad de fertilizar los óvulos.
Stoss y Holtz (1982) aumentaron la motilidad de los espermatozoides de salmón rosado de 30 segundos a 10 minutos mediante la activación con una solución de 120 nm de NaHCO3 a la que se había agregado 1 BMX (3-isobutil-1-metil xantio). Kumar (1989) declaró que la duración del período de almacenamiento es de aproximadamente 20 días en L. rohita y H. molitrix en condiciones criogénicas.
Los huevos de Salmo gairdeneri, Onchorhynchus kisutch y O.keta se fijaron mediante el proceso de extracción y sellado en bolsas de plástico junto con líquido celómico y se mantuvieron bajo oxígeno a 1 ° C. Luego se deja que los huevos se extiendan para formar una capa de uno o dos huevos de profundidad.
Luego, los huevos se mezclaron con la solución de extensión y el crioprotector casi de manera similar a como se describió anteriormente para los espermatozoides. Según Harvey y Kelley (1984), el almacenamiento no congelado (enfriado) de óvulos ha tenido un éxito moderado en los salmónidos, con tiempos de almacenamiento del orden de unas pocas semanas obtenidos a través de la refrigeración de huevos oxigenados en un fluido celómico.
