Prueba de utilización de citrato para verificar la capacidad de una bacteria para utilizar citrato como fuente de carbono

Trate de realizar la prueba de utilización de citrato, para averiguar la capacidad de una bacteria para utilizar el citrato como única fuente de carbono.

Principio:

Algunas bacterias tienen la capacidad de crecer en medios sin C y N orgánicos.

Pueden utilizar citrato de sodio como única fuente de C y dihidrogenofosfato de amonio (NH ₄ H ₂ P0 ₄ ) como única fuente de N. Utilizan NH ₄ H ₂ P0 ₄ para obtener N con producción de NH ₃, lo que aumenta la El pH da como resultado un cambio en el color del azul de bromotimol de verde (pH = 6.9) a azul (pH por encima de 7.6).

En la prueba de utilización de citrato, las bacterias de prueba se cultivan en inclinaciones de agar que no contienen C o N orgánico, en lugar de contener citrato de sodio, NH ₄ H ₂ P0 ₄ y azul de bromotimol. Si la bacteria tiene la capacidad de utilizar citrato como única fuente de C, muestra un crecimiento en los sesgos. También utiliza NH ₄ H ₂ P0 ₄ como única fuente de N, lo que resulta en un cambio en el color de las inclinaciones de verde a azul.

Materiales necesarios:

Tubos de ensayo, matraz cónico, tapones de algodón, aguja de inoculación, autoclave, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente, incubadora, agar citrato Simmons, colonias aisladas o cultivos puros de bacterias.

Procedimiento:

1. Los ingredientes del medio de agar citrato de Simmons (que contiene citrato de sodio, NH ₄ H, P0 ₄ y azul de bromotimol como los ingredientes principales) o su polvo ya preparado requerido para 100 ml del medio se pesan y se disuelven en 100 ml de agua destilada. riegue en un matraz cónico de 250 ml agitando y girando (Figura 7.6).

2. Su pH se determina usando un papel de pH o un medidor de pH y se ajusta a 6.9 usando 0.1N HC1 si es más o usando 0.1N NaOH si es menos.

3. El matraz se calienta para disolver el agar en el medio completamente.

4. Antes de que se solidifique, el medio en estado fundido caliente se distribuye en 5 tubos de ensayo (aproximadamente 20 ml cada uno).

5. Los tubos de ensayo están tapados con algodón, cubiertos con papel artesanal y atados con hilo o banda de goma.

6. Se esterilizan a 121 ° C (15 psi de presión) durante 15 minutos en un autoclave.

7. Después de la esterilización, se retiran del autoclave y se mantienen en una posición inclinada para enfriar y solidificar el medio, a fin de obtener inclinaciones de agar citrato.

8. Las bacterias de prueba se inoculan de forma aséptica, preferiblemente en una cámara de flujo laminar, en los tubos inclinados clavándolos en el extremo y rayándolos en la superficie de los tubos inclinados con la ayuda de una aguja esterilizada con flama. La aguja se esteriliza después de cada inoculación.

9. Los sesgos inoculados se incuban a 37 ° C durante 24 a 48 horas en una incubadora.