Experimento de Voges-Proskauer en bacterias para encontrar su capacidad de utilizar glucosa (con la figura)

Lea este artículo para obtener información sobre la prueba de Voges-Proskauer (prueba VP) sobre bacterias para descubrir su capacidad para utilizar la glucosa con la producción de acetilmetilcarbinol.

Principio:

Algunas bacterias tienen la capacidad de utilizar la glucosa y convertirla en acetilmetilcarbinol (acetoína), que es un producto final neutro.

Estas bacterias inicialmente metabolizan la glucosa en ácido pirúvico, que se metaboliza aún más a través del ácido acético intermedio metabólico en acetilmetilcarbinol (acetoína) y CO2 a través de la "vía del butilenglicol".

El acetilmetilcarbinol se oxida a diacetilo en presencia de a-naftol en condiciones alcalinas (40% KOH). El diacetilo reacciona con el grupo de creatina guanidina (de la peptona utilizada en el medio de cultivo) para producir un color rosa rosa.

En la prueba de Voges-Proskauer (prueba VP), las bacterias de prueba se cultivan en un medio de caldo que contiene glucosa. Si las bacterias tienen la capacidad de utilizar glucosa con la producción de acetilmetilcarbinol (acetoína) como producto final neutro, el caldo adquiere un color rosa rosa al agregar una solución de a-naftol seguido de KOH al 40%.

Materiales necesarios:

Tubos de ensayo, matraz cónico, tapones de algodón, bucle de inoculación, autoclave, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente, incubadora, caldo MR-VP (o caldo de fosfato de glucosa), solución VP I (solución de reactivo de Barritt A) y solución VP II (Solución de reactivo B de Barritt), colonias aisladas o cultivos puros de bacterias.

Procedimiento:

1. Los ingredientes del medio de caldo MR-VP (que contiene glucosa como componente principal) o de su polvo prefabricado requerido para 100 ml del caldo se pesan y se disuelven en 100 ml de agua destilada en un matraz cónico de 250 ml agitando y agitando. Remolino (Figura 7.5). El caldo usado para la prueba de rojo de metilo también se puede usar aquí. Por lo general, el mismo caldo se utiliza para ambas pruebas (MR y VP) al mismo tiempo.

2. Su pH se determina usando un papel de pH o un medidor de pH y se ajusta a 6.9 usando 0.1N HCI si es más o usando 0.1N NaOH si es menos. El matraz se calienta, si es necesario, para disolver los ingredientes por completo.

3. El caldo se distribuye en cinco tubos de ensayo (aproximadamente 10 ml cada uno), tapados con algodón, cubiertos con papel artesanal y atados con hilo o banda de goma.

4. Los tubos de caldo se esterilizan a 121 ° C (15 psi de presión) durante 15 minutos en un autoclave.

5. Los tubos de caldo se dejan enfriar a temperatura ambiente.

6. Las bacterias de prueba se inoculan asépticamente, preferiblemente en una cámara de flujo laminar, en el caldo con la ayuda de un bucle de inoculación esterilizado sobre una llama Bunsen. El bucle se esteriliza después de cada inoculación.

7. Los tubos de caldo inoculados se incuban a 37 ° C durante 48 a 72 horas en una incubadora.

8. La solución de VP I (que contiene α-naftol) se coloca en los tubos de caldo (0, 2 ml cada uno) y se mezcla bien.

9. La solución de VP II (que contiene KOH) se coloca en los tubos de caldo (0, 6 ml cada uno), se mezcla bien y se deja reposar durante 30 minutos a 2 horas.