Notas de estudio sobre la citometría de flujo avanzada
El artículo mencionado a continuación proporciona notas de estudio sobre la citometría de flujo avanzada.
La citometría de flujo es la técnica reciente desarrollada durante las últimas dos décadas para estudiar el contenido de las células, especialmente la eficiencia del empaquetamiento nuclear. Además de la NPE, las características físicas y químicas de los contenidos de las diversas células y las condiciones patológicas podrían analizarse rápidamente con una conclusión correcta.
Los citómetros de flujo están disponibles en el mercado en forma de una máquina. La máquina consiste en un sistema de fluido, un sistema óptico para recolectar señales de luz generadas como células que pasan a través del láser. La máquina también cuenta con un sistema electrónico que convierte las señales luminosas en señales electrónicas proporcionales que se digitalizan en última instancia para el análisis computarizado.
Se pudieron escanear aproximadamente 5000 células por segundo, midiendo individualmente una tras otra, a partir de la suspensión de una población heterogénea.
El sofisticado diseño del sistema Fludics cuenta con láser, óptica, electrónica y clasificación. El sistema Fludics tiene un clasificador de células activadas por fluorescencia (sistema de fluidos FACS Calibur), durante la clasificación puede clasificar la precisión del recuento de una sola célula.
El resultado es una alta pureza con una recuperación que cae entre una sola célula y una recuperación. Se ha controlado electrónicamente con tres botones para seleccionar el modo operativo PRIME, STAND BY y RUN. La tasa de control es tan alta; (60 ul / min.), Medio (35 ul / min) y bajo (12 ul / min).
La excitación y emisión, los fluorocromos, los filtros y la compensación de color son la parte importante del equipo. El filtro 530/30 BP mide las señales emitidas por el isotiocianato de fluorescencia (tinción). Si se usa Phycoerythrin y Popidium Iodide, entonces se usa el filtro 585/42 BP. Se utilizan 650 filtros LP si se generan clorofila de peridinina y señal de 7-amino-actinomicina D.
Las señales del láser son leídas por el software de búsqueda de células Becton Dickinson. El detector de fluorescencia y los filtros de banda deben ajustarse según las instrucciones y los requisitos del instrumento. Las fuentes de luz láser de argón de 488 nm y el filtro de paso de banda de 623 nm están comúnmente presentes en el equipo.
También está teniendo sistema para mostrar datos y análisis. Los parámetros importantes son histogramas, datos de múltiples parámetros, y datos de modo de lista y activación. El análisis de la máquina de los datos con la ayuda del software proporcionado y los histogramas del contenido de ADN frente al recuento que se muestran en la computadora automáticamente (49.2).
Las aplicaciones del citómetro de flujo son numerosas y son una gran ayuda para la investigación biológica y para las investigaciones clínicas en muchas enfermedades humanas. El citómetro de flujo se utiliza para el estudio de los linajes sanguíneos en el tejido hemopoítico en las células renales de la cabeza de los peces que respiran aire.
Puede ser fácil distinguir entre la célula madre hematopoyética pluripotente y el fenotipo de la población madura funcional de linfocitos periféricos. El uso significativo de este equipo es para estudiar la apoptosis o la muerte celular y también para estudiar la necrosis de las células debido a la toxicidad de los pesticidas.
Debido a las señales de dispersión de gran angular, es posible resolver linfocitos, monocitos y granulocitos a partir de muestras de sangre entera lisada. También es posible separar las plaquetas del ruido de fondo. Se utiliza para el sistema inmunológico y en inmunofenotipificación. Se utiliza para estudiar leucemia y linfoma, investigación de trasplantes, enumeración de reticulocitos y análisis de los contenidos de ADN celular.
Debido al mecanismo de procesamiento del pulso, es ventajoso en el análisis del ciclo celular del ADN. El análisis de NPE se utiliza para diferenciar el cáncer de mama primario y la metástasis, el cáncer de colon primario y la metástasis de colon, así como el cáncer gástrico y ovárico (Fig. 49.2).
El protocolo utilizado es que las primeras células se eliminaron y se fijaron en paraformaldehído al 3%. Se permeabilizan con Triton al 100% x 100. El ADN nuclear se marcó con yoduro de popidio después del tratamiento con ARNasa utilizando el kit de ADN Cycle Test Plus.
