Prueba de hidrólisis del almidón en bacterias para descubrir su capacidad para hidrolizar el almidón

Prueba de hidrólisis del almidón en bacterias para descubrir su capacidad para hidrolizar el almidón.

Principio:

Algunas bacterias tienen la capacidad de hidrolizar el almidón, ya que pueden producir la enzima sacarololítica.

Mientras que el almidón forma un color azul oscuro con yodo, sus productos finales hidrolizados no adquieren ese color azul oscuro con yodo.

En la prueba de hidrólisis del almidón, las bacterias de prueba se cultivan en placas de agar que contienen almidón. Después de que las colonias de las bacterias son visibles, las placas se inundan con solución de yodo. Si las bacterias tienen la capacidad de hidrolizar el almidón, sus colonias hidrolizan el almidón en el medio en las áreas que lo rodean, mientras que el resto de las áreas de las placas contienen almidón no hidrolizado.

Como resultado, cuando se inunda con solución de yodo, se forman zonas transparentes claras alrededor de las colonias, ya que los productos hidrolizados que se forman a su alrededor no forman un color azul oscuro con yodo. Por otro lado, el resto de las áreas de las placas se vuelven azul oscuro, ya que el yodo forma un color azul oscuro con el almidón no hidrolizado en estas áreas.

Materiales necesarios:

Placas de Petri, matraz cónico, tapones de algodón, bucle de inoculación, autoclave, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente de eliminación, incubadora, agar de almidón, solución de yodo de Lugol, colonias aisladas o cultivos puros de bacterias.

Procedimiento:

1. Se limpian dos placas de petri, se cubren con papel artesanal y se atan con hilo o banda de goma (Figura 7.21). Este paso, así como la esterilización de las placas de Petri en el paso 6, se omite, si las placas de Petri esterilizadas en horno se utilizan directamente.

2. Los ingredientes del medio de agar de almidón (que contiene almidón como el componente principal) o su polvo ya preparado requerido para 100 ml del medio se pesan y se disuelven en 100 ml de agua destilada en un matraz cónico de 250 ml agitando y agitando.

3. Su pH se determina usando un papel de pH o un medidor de pH y se ajusta a 7.2 usando 0.1N HCI si es más o usando 0.1N NaOH si es menos.

4. El matraz se calienta para disolver el agar en el medio completamente.

5. El matraz está tapado con algodón, cubierto con papel artesanal y atado con hilo o banda de goma.

6. Las dos placas de Petri y el matraz cónico que contiene medio de agar de almidón se esterilizan a 121 ° C (15 psi de presión) durante 15 minutos en un autoclave.

7. Después de la esterilización, se retiran del autoclave y se dejan enfriar durante algún tiempo, sin dejar que el medio se solidifique. El enfriamiento del medio evita la condensación y la acumulación de gotas de agua dentro de las placas. Si el medio ya ha sido preparado y solidificado durante el almacenamiento, debe licuarse calentándolo cuidadosamente hasta que se derrita por completo.

8. Para preparar las placas de agar de almidón, antes de que el medio de agar de almidón esterilizado se enfríe y solidifique, en estado fundido caliente, se vierte asépticamente, preferiblemente dentro de una cámara de flujo laminar, en las dos placas de Petri esterilizadas (aproximadamente 20 ml cada una), de modo que El medio fundido cubre completamente el fondo de las placas de Petri.

Luego, las placas se cubren con sus tapas y se dejan enfriar, para solidificar el medio en ellas. El vapor de agua que puede condensarse en la superficie interna de las placas y tapas se evapora manteniendo las placas y las tapas en una posición invertida en una incubadora a 37 ° C durante aproximadamente 1 hora.

9. Cada placa está marcada en el lado inferior en cuatro cuartos.

10. La "inoculación puntual" de las bacterias de prueba se realiza de forma aséptica, preferiblemente dentro de una cámara de flujo laminar, en el centro de cada cuarto haciendo una mancha (o una pequeña muestra) de las bacterias con la ayuda de un bucle esterilizado por llama. El bucle se esteriliza después de cada inoculación.

11. Las placas inoculadas se incuban en posición invertida, de arriba a abajo, a 37 ° C durante 24 a 48 horas en una incubadora hasta que las colonias de las bacterias son visibles.

12. Las placas se inundan con solución de yodo de Lugol.