Prueba de desminización de fenilalanina en bacterias para determinar su capacidad para desaminar el aminoácido (con la figura)

¡Lea este artículo para aprender sobre la prueba de desaminación de fenilalanina en bacterias para descubrir su capacidad para desaminar el aminoácido!

Principio:

Algunas bacterias tienen la capacidad de desaminar el aminoácido fenilalanina, ya que pueden producir la enzima 'fenilalanina desaminasa'.

Esta enzima desamina fenilalanina mediante la eliminación de su grupo amino, lo que produce ácido fenilpirúvico (un ácido ceto) y amoníaco (NH3). El ácido fenilpirúvico forma un color verde con una solución de cloruro férrico.

En la prueba de fenilalanina desaminasa, la bacteria de prueba se cultiva en inclinaciones de agar que contienen fenilalanina. Si las bacterias tienen la capacidad de desaminar la fenilalanina, el color de las inclinaciones cambia de amarillo a verde, al dejar caer sobre él una solución de cloruro férrico.

Materiales necesarios:

Tubos de ensayo, matraz cónico, tapones de algodón, bucle de inoculación, autoclave, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente, incubadora, agar de fenilalanina, solución de cloruro férrico (10%), colonias aisladas o cultivos puros de bacterias.

Procedimiento:

1. Los ingredientes del medio de fenilalanina agar (que contiene fenilalanina como componentes principales) o de su polvo prefabricado requerido para 100 ml del medio se pesan y disuelven en 100 ml de agua destilada en un matraz cónico de 250 ml agitando y agitando ( Figura 7.17).

2. Su pH se determina usando un papel de pH o un medidor de pH y se ajusta a 7.2 usando 0.1N HCI si es más o usando 0.1N NaOH si es menos.

3. El matraz se calienta para disolver el agar en el medio completamente.

4. Antes de que se solidifique, el medio en estado fundido caliente se distribuye en 5 tubos de ensayo (aproximadamente 20 ml cada uno).

5. Los tubos de ensayo están tapados con algodón, cubiertos con papel artesanal y atados con hilo o banda de goma.

6. Se esterilizan a 121 ° C (15 psi de presión) durante 15 minutos en un autoclave.

7. Después de la esterilización, se retiran del autoclave y se mantienen en una posición inclinada para enfriar y solidificar el medio, a fin de obtener inclinaciones de fenilalanina agar.

8. Las bacterias de prueba se inoculan de forma aséptica, preferiblemente en una cámara de flujo laminar, mediante rayas en la superficie de las inclinaciones con la ayuda de un bucle esterilizado por llama. El bucle se esteriliza después de cada inoculación.

9. Los sesgos inoculados se incuban a 37 ° C durante 24 a 48 horas en una incubadora.

10. Se añaden 4-5 gotas de solución de cloruro férrico (10%) a cada inclinación.

Observaciones:

1. El color de los cambios de inclinación creció. Fenilalanina desaminasa positiva.

2. El color de la inclinación permanece amarillo: fenilalanina desaminasa negativa.