Litmus Milk Test en bacterias para descubrir su capacidad para transformar los componentes de la leche en productos finales

¡Litmus Milk Test en bacterias para descubrir su capacidad para transformar los componentes de la leche en productos finales!

Principio:

Algunas bacterias tienen la capacidad de crecer en la leche y transformar diferentes componentes de la leche en productos finales variados. La leche es una mezcla compleja de varios componentes.

Los principales componentes capaces de transformarse por bacterias son la lactosa, el azúcar de la leche y las proteínas de la leche, la caseína, la lacto-albúmina y la lacto-globulina.

Diferentes bacterias tienen diferentes sistemas enzimáticos, debido a que actúan sobre diferentes componentes y los transforman en productos metabólicos finales variados, que son características de las bacterias.

La prueba de la leche de tornasol se realiza para descubrir la capacidad de una bacteria para transformar diferentes componentes de la leche, lo que se manifiesta como un cambio en el color del tornasol, la producción de gas, la formación de cuajada, etc. El tornasol es un indicador de pH e indicador de reducción de oxidación, que Cambia de color según el estado del caldo.

En la prueba de leche de tornasol, la bacteria de prueba se cultiva en un medio de caldo que contiene leche y tornasol. Si la bacteria tiene la capacidad de transformar diferentes componentes de la leche en productos finales variados, crece en el caldo y transforma los componentes de diferentes maneras dependiendo de sus sistemas enzimáticos.

Las seis transformaciones más importantes, que se pueden observar en la leche de tornasol como resultado de las actividades bacterianas, son las siguientes:

(i) Fermentación de lactosa

(ii) Formación de gas.

(iii) Reducción de tornasol.

(iv) Formación de cuajada.

(v) Proteolisis (Peptonización)

(vi) Reacción alcalina.

(i) Fermentación de lactosa:

Las bacterias capaces de utilizar la lactosa como fuente de carbono para la producción de energía utilizan la enzima inducible p-galactosidasa y degradan la lactosa a glucosa y galactosa. La glucosa se degrada más a través de la vía de Embden-Meyerhof al ácido pirúvico, que a su vez se convierte en ácido láctico. La acumulación de ácido láctico reduce el pH del medio a aproximadamente 4.0, debido a que el color del torna cambia de púrpura a un pH neutro a rosa al pH ácido.

(ii) Formación de gas:

Los productos finales de la fermentación bacteriana de la lactosa pueden incluir gases como el dióxido de carbono y el hidrógeno. La presencia de estos gases puede verse como separaciones de la cuajada o por el desarrollo de pistas o fisuras dentro de la cuajada, a medida que los gases suben a la superficie.

(iii) Reducción de tornasol:

La fermentación es un proceso anaeróbico que implica la oxidación que se produce en ausencia de oxígeno molecular. La oxidación puede ocurrir ya sea por la adición de oxígeno o la eliminación de iones de hidrógeno. La fermentación de lactosa, al ser un proceso anaeróbico, implica la eliminación de iones de hidrógeno.

Dado que el ion hidrógeno no puede existir en el estado libre, debe haber un aceptor de ion hidrógeno. En la prueba de la leche de tornasol, el tornasol actúa como el aceptor del ión de hidrógeno. El tornasol es púrpura en el estado oxidado, pero cuando acepta hidrógeno, se reduce y se vuelve blanco o de color leche.

(iv) Formación de cuajada:

Las actividades bioquímicas de diferentes bacterias cultivadas en la leche de tornasol pueden dar como resultado la producción de dos tipos distintos de cuajada (coágulos). La cuajada se designa como "cuajada ácida" o como "cuajada de cuajo" según el mecanismo bioquímico responsable de su formación.

En el caso de la cuajada ácida, el ácido láctico u otros ácidos orgánicos, en presencia de iones de calcio, causan la precipitación de la proteína de la leche, la caseína como caseinato de calcio para formar un coágulo insoluble. El coágulo es duro y no se retrae de la pared del tubo de ensayo. Una cuajada ácida se identifica fácilmente si el tubo de ensayo se invierte y el coágulo permanece inmóvil.

En el caso de cuajo de cuajo, algunas bacterias producen renina, una enzima que actúa sobre la caseína para formar paracaseína, que, en presencia de iones de calcio, se precipita como paracaseinato de calcio y forma un coágulo insoluble. A diferencia de la cuajada ácida, este es un coágulo semisólido suave que fluye lentamente, cuando el tubo de ensayo está inclinado.

(v) Proteolisis (Peptonización):

Algunas bacterias, que no tienen la capacidad de obtener energía mediante la fermentación de la lactosa, usan otras fuentes nutricionales como las proteínas para este propósito. Por medio de enzimas proteolíticas, estas bacterias hidrolizan las proteínas de la leche, principalmente la caseína, a sus componentes básicos, a saber, los aminoácidos.

El tornasol se torna de un color púrpura intenso en la parte superior del tubo, mientras que el medio comienza a perder cuerpo y produce una apariencia translúcida, marrón, parecida al suero, ya que las proteínas se hidrolizan a aminoácidos.

(vi) Reacción alcalina:

Una reacción alcalina es evidente cuando el color del medio permanece sin cambios o cambia a azul profundo. Esta reacción es indicativa de la degradación parcial de la caseína por las bacterias en cadenas polipeptídicas más cortas, con la liberación simultánea de productos finales alcalinos que son responsables del cambio de color observable.

Materiales necesarios:

Tubos de ensayo, matraz cónico, tapones de algodón, bucle de inoculación, autoclave, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente, incubadora, caldo de leche de litmus, colonias aisladas o cultivos puros de bacterias.

Procedimiento:

1. Los ingredientes del medio de caldo de leche de tornasol o su polvo listo para usar para 100 ml del caldo se pesan y se disuelven en 100 ml de agua destilada en un matraz cónico de 250 ml agitando y agitando (Figura 7.12).

2. Su pH se determina usando un papel de pH o un medidor de pH y se ajusta a 6.8 usando 0.1N HCI si es más o usando 0.1N NaOH si es menos. El matraz se calienta, si es necesario, para disolver los ingredientes por completo.

3. El caldo se distribuye en cinco tubos de ensayo (aproximadamente 10 ml cada uno), tapados con algodón, cubiertos con papel artesanal y atados con hilo o banda de goma.

4. Los tubos de caldo se esterilizan a 121 ° C durante 15 minutos en un autoclave.

5. Los tubos de caldo se dejan enfriar a temperatura ambiente.

6. Las bacterias de prueba se inoculan asépticamente, preferiblemente en una cámara de flujo laminar, en el caldo con la ayuda de un bucle de inoculación esterilizado sobre una llama Bunsen. El bucle se esteriliza después de cada inoculación.

7. Los tubos de caldo inoculados se incuban a 37 ° C durante 24 a 48 horas en una incubadora.

Observaciones:

1. El color del caldo cambia a rosado: fermentación de lactosa.

2. Caldo se convierte en cuajada sólida con fisuras en él: Formación de gas.

3. El color del caldo cambia a blanco con el anillo púrpura en la parte superior: reducción de tornasol.

4. El caldo se vuelve blanco sólido cuajada con anillo púrpura en la parte superior: formación de cuajada.

5. El caldo se vuelve translúcido pardo a suero con un anillo de color morado oscuro en la parte superior: proteólisis.

6. El color del caldo permanece sin cambios o cambia a azul profundo: reacción alcalina.