Fluorescente in situ hibridación (FISH)

En este artículo discutiremos sobre la Hibridación in situ fluorescente (FISH).

Es una técnica de laboratorio utilizada para determinar cuántas copias del segmento específico de ADN están presentes en una célula. Identifica la región cromosómica específica en preparaciones citológicas. En el laboratorio, un segmento de ADN se modifica químicamente o se tiñe con un colorante fluorescente y cuando se examina bajo un microscopio fluorescente se ve un color fluorescente muy brillante.

La hibridación de fluorescencia in situ ha aumentado considerablemente la sensibilidad, especificidad y resolución del análisis de cromosomas.

Las ventajas de esta técnica son numerosas, pero algunas se mencionan a continuación:

(1) La resolución de este método es mucho mejor que la de las bandas de cromosomas tradicionales y aproximadamente 2 mega bases (Mb) de longitud.

(2) El protocolo de esta técnica es fácil y es aplicable tanto para células en división como para células sin división. Esta técnica puede identificar un rango de mutaciones que incluyen eliminación, duplicación, aneuploidía y presencia de cromosomas derivados. Esta técnica también se usa comúnmente para controlar enfermedades recurrentes o residuales en pacientes con trasplante de médula ósea.

FISH (Fluorescent In Situ Hybridization) se realiza generalmente en sangre periférica estimulada tanto para el análisis cromosómico como para la identificación de la translocación específica y la eliminación. Por ejemplo, se utiliza para demostrar el cromosoma Filadelfia (Ph 1 ) formado por la translocación entre los cromosomas 9 y 22 y causa una leucemia mielógena crónica (LMC).

También se utiliza en la identificación de la translocación entre los cromosomas 8 y 14 que causan el linfoma de Burkitt y entre los cromosomas 18 y 14 que resultan en la leucemia de células B. También se utiliza para el diagnóstico del síndrome de Down.

En el procedimiento FISH, se pueden preparar cultivos celulares. Los cromosomas metafase / prometafase se fijan en un portaobjetos de vidrio. Además, FISH puede modificarse para el análisis de núcleos de interfase. Entonces, los cromosomas se desnaturalizan; luego se introduce una sonda de ADN marcada y luego se hibrida la sonda con el cromosoma en la diapositiva. Por lo tanto, se da el término hibridación in situ.

Las sondas de ADN están marcadas con fluorocromo, tal sonda da una señal fluorescente y podría verse con microscopía de fluorescencia. La fluorescencia se podría deducir con la ayuda de filtros unidos al microscopio fluorescente.

Las sondas FISH tienen una longitud de aproximadamente 40 kilo (kb) y se detectan como una doble señal fluorescente en cada miembro de un par de cromosomas. El punto doble corresponde a las señales de cada una de las dos cromátidas hermanas alineadas.

En su aplicación simple, un patrón FISH normal para cualquiera de estas sondas sería dos conjuntos de puntos dobles, un conjunto para cada miembro de los cromosomas normalmente emparejados. Estos puntos dobles a menudo se fusionan para formar una señal. Las células monosómicas para la región cromosómica en cuestión mostrarían solo un conjunto único de puntos dobles por núcleo, mientras que las células trisómicas mostrarían tres conjuntos de puntos dobles.