Técnica de anticuerpos de fluorescencia para la detección de una bacteria en particular en una muestra

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La técnica de inmunofluorescencia o anticuerpos de fluorescencia es un procedimiento rápido y confiable para la detección de bacterias particulares en una muestra. Se encuentran disponibles varios anticuerpos, marcados con colorantes fluorescentes, como el isocianato de fluoresceína o el isotiocianato, cada uno específico para bacterias particulares.

Uno de estos anticuerpos marcados, específicos para la bacteria en particular que se detectará, se agrega en gotas a un frotis fijado por calor de la muestra desconocida de bacterias en un portaobjetos y se extiende suavemente sobre la superficie del frotis. Un papel de filtro humedecido se coloca dentro de una placa de Petri.

Luego, la diapositiva se coloca dentro de ella en una varilla de vidrio en forma de U y se incuba a 25 ° C durante 35 minutos. El exceso de anticuerpo en el frotis se elimina con solución salina tamponada con fosfato al 1%. El portaobjetos se sumerge en un frasco de Coplin que contiene solución salina tamponada con fosfato al 1% a 25 ° C durante 10 minutos. El portaobjetos se seca con papel bibuloso. Se añade una gota de glicerol al frotis. Se cubre con un cubreobjetos y se examina bajo un microscopio de fluorescencia.

Si las bacterias específicas del anticuerpo marcado utilizado están presentes en la muestra desconocida de bacterias, se forma un complejo antígeno-anticuerpo (aquí, la bacteria es el antígeno). Cuando el anticuerpo está marcado con una sustancia fluorescente, el complejo antígeno-anticuerpo emite fluorescencia, cuando se observa bajo el microscopio de fluorescencia. Si las bacterias específicas del anticuerpo están ausentes, el anticuerpo fluorescente se elimina por lavado y no se observa fluorescencia.