Experimento: Prueba de motilidad de una bacteria: mediante la preparación de gotas colgantes (con la figura)
Trate de realizar la prueba de motilidad de una bacteria, al colgar la preparación de gotas, para averiguar si es móvil o no móvil.
Propósito:
Motilidad significa capacidad de movimiento por poder propio. Según la motilidad, las bacterias se pueden dividir en dos grupos de la siguiente manera.
(1) Bacterias Motiles:
Una bacteria, que tiene la capacidad intrínseca de movimiento en el medio circundante, en la que permanece suspendida, es una bacteria móvil.
(2) Bacterias no móviles:
Una bacteria, que no tiene la capacidad intrínseca de movimiento en el medio circundante, en la que permanece suspendida, es una bacteria no móvil. Las bacterias no móviles pueden mostrar una motilidad aparente, como resultado de su movimiento browniano causado por el bombardeo de las moléculas de agua en el medio circundante, en las células bacterianas.
En el montaje húmedo, aunque se puede observar la forma y el tamaño de las bacterias, la motilidad puede verse obstaculizada, ya que la suspensión se presiona entre la corredera y el cubreobjetos. Es por eso que; La preparación de gotas colgantes o la prueba de motilidad se realizan para una observación clara de la motilidad de las bacterias, además de su forma y tamaño. Es útil en la identificación de bacterias.
Principio:
Una gota muy pequeña de suspensión de bacterias se cuelga del centro de un deslizamiento de la cubierta en la cavidad de un deslizamiento de cavidad. La gota colgante se observa bajo un microscopio utilizando un objetivo de inmersión en aceite. Si las bacterias son móviles, se puede ver que sus células tienen un movimiento errático en el medio circundante.
Por el contrario, si no es móvil, sus células permanecen estáticas en el medio sin ningún movimiento o pueden mostrar un movimiento browniano como resultado del bombardeo de las moléculas de agua en el medio, en las células bacterianas.
Materiales necesarios:
Diapositiva de cavidad, cubreobjetos, vaselina o vaselina, aceite de inmersión, cultivo en caldo de bacterias de 24 horas de edad, bucle y microscopio (compuesto, campo oscuro o contraste de fase).
Procedimiento:
1. Una diapositiva de la cavidad se limpia adecuadamente con agua del grifo, de modo que el agua no quede como gotas en su superficie. Un portaobjetos de cavidad es un portaobjetos de vidrio con una pequeña depresión redonda en el centro, en la que puede colgar una pequeña gota de suspensión de bacterias (Figura 5.3).
2. El portaobjetos se seca limpiando con papel absorbente y, posteriormente, moviéndolo sobre una llama o manteniéndolo al sol.
3. Se aplica un anillo de vaselina (o vaselina) alrededor de la cavidad.
4. Un asa se esteriliza sobre llama y se enfría. Se toma una porción de la suspensión de bacterias del cultivo de caldo de 24 horas de forma aséptica. Una pequeña gota de la suspensión se coloca en el centro de un cubreobjetos. La cultura del caldo no debe tener más de 24 horas de vida, ya que las bacterias pueden perder su motilidad a medida que envejecen.
5. El deslizamiento de la cavidad se invierte y se coloca sobre el cubreobjetos, de forma que la cavidad cubra la gota.
6. La tapa deslizante y el cubreobjetos se presionan con suavidad para que la cavidad quede sellada. Se debe tener cuidado de ver que ninguna parte de la cavidad toque la gota.
7. La diapositiva se invierte rápidamente, de modo que la gota cuelga en la cavidad sin tocarla.
8. La diapositiva se recorta a la etapa del microscopio.
9. El borde de la gota se enfoca bajo el objetivo de baja potencia.
Las razones para enfocar el borde de la caída son las siguientes:
(a) Se obtiene un mejor contraste debido a la diferencia en el índice de refracción de la caída y el deslizamiento de la cubierta.
(b) A medida que la gota cuelga, se adelgaza hacia el borde, para lo cual el borde contiene menos cantidad de bacterias que deben observarse claramente para determinar la motilidad.
(c) Por lo general, las bacterias aeróbicas se acercan al borde para obtener más oxígeno para la respiración, por lo que se pueden observar en el borde.
10. Una gota de aceite de inmersión se coloca en el cubreobjetos justo encima de la gota colgante y el borde de la gota colgante se observa bajo el objetivo de inmersión en aceite del microscopio. Preferiblemente, se debe usar un microscopio de contraste de fase o de campo oscuro para una observación clara.
Observaciones (bajo el objetivo de inmersión en aceite):
1. Motilidad:
Móvil o no móvil
2. Forma de las bacterias:
Esférica (coccus)
En forma de varilla (bacilos)
Como comas (vibrio)
Espiral (espiroquetas)
3. Arreglo de bacterias:
Pares (diplobacilos / diplococos)
En cuatro (tétradas)
En cadenas (estreptococos / estreptobacilos)
Racimos similares a la uva (estafilococos)
Cuboidal (sarcinae u octeto).
4. Tamaño de las bacterias:
A simple vista, haga un dibujo del campo bajo el objetivo de inmersión en aceite.
(3) Tinción:
Propósito de la tinción:
El índice de refracción de las células bacterianas es muy cercano al del agua, en el que se suspenden durante la observación y también al del portaobjetos, en el que se observan al microscopio. Por lo tanto, es muy difícil observarlos claramente.
Para superar esta dificultad, las células se tiñen con manchas, que imparten un color profundo a las células y un color claro al medio circundante, en el que están suspendidas. Las celdas de colores profundos obtienen un claro contraste con el fondo de color claro y se pueden observar claramente.
Por lo tanto, la tinción es un método para impartir color a los microorganismos transparentes por lo demás incoloros con la ayuda de varios tintes biológicos llamados "tintes" para su observación microscópica.
Química de las manchas:
Los agentes colorantes son de los siguientes tres tipos:
1. Tintes:
Se utilizan para colorear para fines generales, como colorear materiales textiles y pintar paredes.
2. Manchas:
Se utilizan para colorear espécimen biológico o microbiológico. Estos son más precisos y exigentes.
3. Indicadores:
Son sustancias químicas que cambian de color con el cambio en la concentración de iones de hidrógeno (pH).
Aunque "mancha" es el término apropiado, el término "tinte" se usa ampliamente en microbiología para significar agentes colorantes. En el pasado, los tintes naturales se preparaban a partir de diversas plantas. Han sido ampliamente reemplazados por tintes sintéticos.
Como el primer colorante sintético se preparó a partir de anilina, todos los tintes sintéticos se denominan "tintes de anilina". Sin embargo, la mayoría de estos tintes ahora se producen a partir de alquitrán de hulla, por lo que ahora se llaman "tintes de alquitrán de hulla". Los tintes de alquitrán de hulla son derivados del benceno. Una molécula de tinte consta de tres componentes (Figura 5.4) como se indica a continuación.
(a) Un anillo de benceno.
(b) Un grupo cromóforo.
(c) Un grupo auxocromo.
El benceno es un disolvente orgánico incoloro, mientras que el cromóforo es el componente colorante del tinte. El benceno se combina con el cromóforo para formar el cromógeno (Figura 5.5). Como el cromógeno no posee la propiedad de disociarse, no puede combinarse con las células y se elimina fácilmente por lavado.
Cuando un cromógeno se combina con un auxocromo, se forma un tinte o mancha. El auxocromo imparte la propiedad de disociación electrolítica (propiedad de formación de sal) al colorante. Así, químicamente, una mancha se define como un compuesto orgánico que contiene un anillo de benceno, un grupo cromóforo y un grupo auxocromo.
Tipos de tinción:
La tinción de bacterias es de diferentes tipos como se describe a continuación (Figura 5.6).
I. Tinción simple:
Aquí solo se usa una mancha. Esta tinción se utiliza para observar la forma (cocos, bacilos, vibrio, espirilos) y la disposición (simple, par, tétrada, cadena, grupo) de las bacterias.
Es de dos tipos de la siguiente manera:
A. tinción básica:
En la tinción básica, se usa una tinción básica, como azul de metileno, cristal violeta o fucsina de carbol, para teñir las células bacterianas. La mancha se une fuertemente a las células bacterianas e imparte un color profundo de la mancha a las células, mientras que el medio circundante obtiene un color claro de la mancha.
B. Tinción ácida:
En la tinción ácida, se usa una tinción ácida, como la eosina o la nigrosina, para teñir negativamente las células bacterianas. La mancha hace que el color circundante, mientras que la célula bacteriana permanece incolora.
II. Tinción diferencial:
Aquí, se utilizan más de una mancha. Se realiza para los siguientes fines.
A. Separación en grupos:
Estos métodos de tinción diferencial se realizan para diferenciar las bacterias en diferentes grupos según sus características de tinción.
Estos métodos incluyen los siguientes:
(una) Tinción de Gram:
Este método de tinción se realiza para diferenciar entre bacterias grampositivas y gramnegativas.
(segundo) Tinción ácido-rápido:
Se realiza para diferenciar entre bacterias ácidas y no ácidas.
B. Visualización de estructuras específicas de bacterias:
Estos métodos de tinción diferencial se realizan para visualizar componentes estructurales específicos de las células bacterianas.
Estos métodos incluyen los siguientes:
(una) Tinción de esporas:
Este método de tinción se usa para teñir la endospora de las bacterias formadoras de esporas.
(segundo) Tinción de la cápsula:
Este método se utiliza para teñir la cápsula, que rodea las bacterias encapsuladas.
(do) Tinción de flagelos:
Se realiza para visualizar flagelos de bacterias flageladas.
(re) Tinción de inclusión:
Este método de tinción se realiza para teñir las inclusiones celulares de células bacterianas como gránulos de volutina, gránulos de glucógeno y gránulos de PBH.
