Experimente para descubrir la capacidad de las bacterias para descarboxilar diferentes aminoácidos (con la figura)

¡Experimente para descubrir la capacidad de las bacterias para descarboxilar diferentes aminoácidos!

Principio:

Algunas bacterias tienen la capacidad de descarboxilar diferentes aminoácidos a las correspondientes aminas y CO2 ya que pueden producir las respectivas enzimas 'aminoácido descarboxilasa'.

Entre ellas, cada bacteria puede descarboxilar solo algunos de los aminoácidos, mientras que no puede descarboxilar los otros.

Por lo tanto, los aminoácidos, que una bacteria puede descarboxilar y los aminoácidos, que no puede ser la característica de la bacteria. La prueba de la descarboxilasa de aminoácidos se realiza para probar, por separado, la capacidad de una bacteria para descarboxilar aminoácidos como la lisina, ornitina y argentina con la producción de C0 ₂ y las respectivas aminas como la cadaverina, putrescina y agmatina.

Si las bacterias pueden

descarboxila uno o más de los aminoácidos, se producen las respectivas aminas, que son alcalinas (básicas) y, por lo tanto, aumentan el pH cambiando el color del bromocresol púrpura de amarillo a púrpura.

En la prueba de la descarboxilasa del aminoácido, la bacteria de prueba se cultiva anaeróbicamente en un medio de caldo que contiene glucosa, bromocresol púrpura y uno de los aminoácidos. El color del caldo cambia inicialmente de púrpura a amarillo debido a la caída en el pH resultante de los ácidos producidos por la fermentación de la glucosa. Si la bacteria tiene la capacidad de descarboxilar el aminoácido, el color del caldo cambia de amarillo a púrpura.

Materiales necesarios:

Tubos de ensayo, matraz cónico, tapones de algodón, bucle de inoculación, autoclave, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente de eliminación, incubadora, caldo de descarboxilasa de aminoácidos, aminoácidos (lisina, ornitina, arginina), parafina líquida, colonias aisladas o cultivos puros de bacterias

Procedimiento:

1. Los ingredientes del medio del caldo de la descarboxilasa del aminoácido (que contiene glucosa y bromocresol púrpura como componentes principales) o su polvo ya preparado requerido para 400 ml del caldo se pesan y se disuelven en 400 ml de agua destilada en un matraz cónico de 500 ml agitando y girando (Figura 7.11).

2. Su pH se determina usando un papel de pH o un medidor de pH y se ajusta a 7.2 usando 0.1N HCI si es más o usando 0.1N NaOH si es menos. El matraz se calienta, si es necesario, para disolver los ingredientes por completo.

3. El caldo de 400 ml se distribuye en cuatro matraces cónicos de 250 ml, de modo que cada matraz contenga 100 ml del caldo.

4. A tres de estos frascos, tres aminoácidos, como lisina, ornitina y arginina, se agregan por separado (0.5 gramos cada uno) y uno se mantiene sin ningún aminoácido como control. El control se utiliza para distinguir entre los cambios de color de dos pasos en el medio de prueba (es decir, de púrpura a amarillo y de amarillo a púrpura).

5. Los caldos en los cuatro matraces cónicos se distribuyen en cuatro juegos separados de tubos de ensayo (aproximadamente 10 ml cada uno), tapados con algodón, cubiertos con papel artesanal y atados con hilo o banda de goma.

6. Los tubos de caldo se esterilizan a 121 ° C (15 psi de presión) durante 15 minutos en un autoclave.

7. Los tubos de caldo se dejan enfriar a temperatura ambiente.

8. La parafina líquida se esteriliza calentando a 180 ° C durante 3 horas en un horno de aire caliente.

9. Las bacterias de prueba se inoculan asépticamente, preferiblemente en una cámara de flujo laminar, en el caldo con la ayuda de un bucle de inoculación esterilizado sobre una llama Bunsen. El bucle se esteriliza después de cada inoculación.

10. La parafina líquida esterilizada se vierte suavemente de forma aséptica en los tubos inoculados, (aproximadamente 1 cm de altura en el medio) para proporcionar una condición anaeróbica.

11. Los tubos de caldo inoculados se incuban a 37 ° C en una incubadora y se observan diariamente hasta que la prueba sea positiva o por un período máximo de 4 días.