Experimento para cultivar virus de animales en huevos de pollos embrionados (con la figura)

¡Experimenta para cultivar virus animales en huevos de pollos embrionados!

Principio:

Los virus solo pueden crecer en sistemas vivos. No pueden crecer en medios no vivos como el agar nutriente o el caldo nutriente. Por lo tanto, su cultivo necesita células huésped susceptibles al virus específico.

El virus, como el bacteriófago, que infecta y crece en las células bacterianas, se cultiva utilizando cultivos de células bacterianas como sistema vivo.

Por ejemplo, el virus colifago (un bacteriófago) se cultiva utilizando el cultivo de la bacteria E. coli. En contraste, los virus animales, que infectan y crecen en el cuerpo de los animales, requieren sistemas de animales vivos susceptibles.

Los tres sistemas de animales vivos utilizados para el cultivo de virus animales en los laboratorios son los siguientes:

1. Animales susceptibles:

En esta técnica, se permite que el virus a cultivar crezca en el cuerpo de un animal vivo como el ratón o el conejillo de indias, que es susceptible a ese virus. Esta técnica ya no se usa, ya que ha sido reemplazada por las siguientes técnicas más recientes, eficientes y económicas.

2. Cultivo de tejidos:

Es una técnica muy sofisticada. Aquí, las células animales que se sabe que son susceptibles al virus que se cultivan y que también se sabe que se multiplican rápidamente se aíslan primero a partir de tejido vivo adecuado de un animal. Estas células se colocan en un recipiente de vidrio o plástico que contiene un medio nutricional extremadamente rico. Las células se adhieren a la superficie del vaso y continúan dividiéndose hasta cubrir toda la superficie con una monocapa confluente de células. Esto se llama cultivo de tejidos.

Luego, el virus que se va a cultivar se inocula en el cultivo de tejido susceptible. El virus infecta las células vivas del cultivo de tejidos, subvierte su maquinaria metabólica y se replica rápidamente, por lo que crece abundantemente en las células.

3. Huevos de pollos embrionados:

En esta técnica simple y económica, el virus que se va a cultivar se inyecta en un huevo de pollo embrionado. El virus crece dentro del huevo vivo del polluelo y causa una enfermedad en el embrión, que se manifiesta por varios síntomas de la enfermedad (efectos citopatógenos) específicos de ese virus. La presencia de estos síntomas indica el crecimiento de ese virus dentro del huevo.

Materiales necesarios:

Dos huevos de pollo embrionados, dispositivo de vela, tintura de yodo, algodón absorbente, 70% de alcohol, un pequeño taladro, dilución 1: 2 del virus de Newcastle, jeringa, vaselina estéril, solución salina estéril, placas de Petri, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente de eliminación, incubadora.

Procedimiento:

1. Dos huevos de pollos embrionados se mezclan con un dispositivo de vela para demostrar la viabilidad del embrión. El embrión es viable si muestra movimiento en respuesta al calor de la luz. Además, las posiciones del saco de aire y los grandes vasos sanguíneos se determinan y marcan en la cáscara del huevo durante la vela (Figura 8.7).

2. La cáscara se desinfecta sobre el saco de aire con tintura de yodo y luego se deja secar. El mismo lugar se limpia con algodón absorbente empapado con alcohol al 70%.

3. La punta de un taladro pequeño se esteriliza sumergiendo en alcohol al 70% y luego flameando.

4. Usando este taladro, se hace un pequeño agujero asépticamente en la cubierta sobre el saco de aire en una región alejada de los vasos sanguíneos.

5. Se inyectan asépticamente 0, 2 ml de la dilución 1: 2 del virus de Newcastle en la cavidad alantoica de uno de los dos huevos con una jeringa esterilizada. Esto se hace sosteniendo el huevo en posición vertical, insertando la aguja de la jeringa a través del orificio de la cáscara hasta su empuñadura en un ángulo de 45 °, perforando la membrana del saco de aire y penetrando en la cavidad alantoica. Este huevo inoculado por virus sirve como "huevo de prueba".

6. Después de la inoculación, se retira la aguja y se sella el orificio de la cubierta con un vasper caliente estéril.

7. Utilizando la misma técnica, se inoculan 0, 2 ml de solución salina estéril en el otro huevo de pollo embrionado, que sirve como "huevo de control".

8. Ambos huevos se incuban a 37 ° C durante 3 a 4 días en una incubadora con humedad adecuada.

9. Las observaciones se anotan todos los días.

10. Una vez que se ha determinado la muerte, el embrión se desplaza de su caparazón y el contenido se vierte en una placa de Petri y se observa nuevamente.

11. Todos los materiales contaminados se desechan en un vaso de precipitados que contiene polvo blanqueador.

Observaciones:

1. Los huevos se cubren todos los días durante la incubación y se observan en busca de muerte embrionaria, como lo demuestra el cese del movimiento, que generalmente ocurre de 3 a 4 días después de la inoculación del virus.

2. Una vez que se ha determinado la muerte, el embrión se desplaza de su caparazón y el contenido se vierte en una placa de Petri. Se observa lesiones necróticas y evidencia de hemorragia.

3. El huevo de control se examina en busca de evidencia de efectos citopatógenos.

4. Las observaciones se registran en la tabla 8.2.