Prueba de coagulasa en bacterias para descubrir sus habilidades para coagular la sangre (con la figura)

Prueba de coagulasa en bacterias para descubrir sus habilidades para coagular sangre (con la figura)!

Principio:

Las cepas patógenas de la bacteria Staphylococcus contienen la enzima coagulasa, que actúa dentro de los tejidos del huésped para convertir el fibrinógeno en fibrina.

La malla de fibrina que se forma rodea las células bacterianas o los tejidos infectados, protegiendo a las bacterias de los mecanismos de resistencia no específicos del huésped, como la fagocitosis y la actividad anti-estafilocócica del suero normal.

Esta enzima también ayuda en la coagulación de la sangre en el huésped al ser un precursor de la sustancia similar a la trombina, que coagula o coagula la sangre. La prueba de coagulasa se realiza para distinguir entre estafilococos coagulasa positiva (patógena o virulenta) y coagulasa negativa (no patógena o avirulenta).

En la prueba de coagulasa, una suspensión de la especie de prueba de Staphylococcus se mezcla con plasma sanguíneo y luego se examina periódicamente el plasma inoculado para determinar la formación de fibrina o la coagulación.

La formación de coágulos dentro de las cuatro horas se interpreta como un resultado positivo e indicativo de una cepa de Staphylococcus virulenta (patógena). La ausencia de coagulación después de 24 horas de incubación es un resultado negativo, indicativo de una cepa virulenta (no patógena).

Materiales necesarios:

Animal de laboratorio (conejo o conejillo de indias), jeringa, anticoagulante (citrato de sodio o heparina), tubos de extracción de sangre, centrifugadora, tubos de ensayo, portaobjetos, bucle de inoculación, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente de eliminación, colonias aisladas o cultivos puros de bacterias del género Staphylococcus.

Procedimiento:

1. La jeringa y los tubos de recolección de sangre se lavan con una solución de citrato de sodio o heparina, para evitar la coagulación de la sangre inmediatamente después de la recolección (Figura 7.24).

2. Con la ayuda de la jeringa, se extrae sangre de animales de laboratorio como conejos o cobayas y se coloca en los tubos de recolección.

3. La sangre se centrifuga a 3000 rpm durante 15 minutos en una centrífuga.

4. El sobrenadante (plasma) se recoge en otro tubo de ensayo con citrato y el residuo (células sanguíneas) se desecha.

(a) Método de deslizamiento:

1. Dos gotas de una suspensión de las bacterias de prueba pertenecientes al género Staphylococcus, se colocan en dos mitades igualmente divididas de un portaobjetos con la ayuda de un bucle de inoculación. Una gota se usa como "control" para ver si la bacteria en sí misma está en grupos y la otra gota se usa como "prueba".

2. A la 'gota de prueba', se agrega una gota del plasma recolectado, se mezcla y se incuba a temperatura ambiente.

3. Las gotas se observan a intervalos de una hora hasta 4 horas.

(b) Método del tubo:

1. Se toman dos pequeños tubos de ensayo. Un tubo de ensayo está marcado como 'prueba' y el otro 'control'. En cada tubo de ensayo, se toman 0, 5 ml de la suspensión bacteriana.

2. Al tubo de 'prueba', se agrega 1 ml de plasma, se mezcla y se incuba

3. Los tubos se observan a intervalos de una hora de hasta 4 horas.