Prueba de catalasa en bacterias para determinar su capacidad para degradar el peróxido de hidrógeno (con la figura)
Prueba de catalasa en bacterias para descubrir su capacidad para degradar el peróxido de hidrógeno (con la figura)!
Principio:
Algunas bacterias tienen la capacidad de degradar el peróxido de hidrógeno (H2O2) a agua (H2O) y oxígeno (0, ↑), ya que pueden producir la enzima 'catalasa'.
La descomposición del peróxido de hidrógeno por la catalasa está indicada por burbujas de gas oxígeno libre (0, ↑).
En la prueba de catalasa, un bucle de las bacterias de prueba se coloca en una gota de peróxido de hidrógeno que se toma en un portaobjetos. Si la bacteria tiene la capacidad de producir catalasa, rompe el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno. La producción de oxígeno produce burbujas o espuma, que pueden notarse en la gota.
Materiales necesarios:
Portaobjetos, papel absorbente, bucle de inoculación, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, peróxido de hidrógeno (3%), colonias aisladas o cultivos puros de bacterias.
Procedimiento:
1. Una diapositiva se limpia con agua del grifo (Figura 7.18).
2. El portaobjetos se limpia con papel absorbente y se seca al aire.
3. Se toma una gota de peróxido de hidrógeno (3%) en el centro de la diapositiva.
4. Un bucle de las bacterias de prueba se toma de forma aséptica, preferiblemente en una cámara de flujo laminar, con la ayuda de un bucle esterilizado por llama y se coloca en la gota de peróxido de hidrógeno en el portaobjetos. El bucle se esteriliza después de cada inoculación.
Observaciones:
1. Se produce burbujeo o formación de espuma en la gota: catalasa positiva.
2. No se producen burbujas o formación de espuma en la gota: negativo de catalasa.
Precauciones
No se puede utilizar un cultivo de bacterias del medio de agar sangre para la prueba de catalasa, ya que la sangre contiene catalasa y siempre da un resultado positivo. Las bacterias negativas a la catalasa tienden a morir en medios sin azúcar ya sea porque producen H2O2 o porque el H2O2 se acumula en los medios cuando se exponen al aire y la luz.
Por lo tanto, los cultivos madre de tales bacterias deben almacenarse en la oscuridad y donde el acceso al aire es limitado. La catalasa se encuentra en casi todas las bacterias que pueden crecer aeróbicamente. Como la enzima es producida solo por bacterias viables, los cultivos de más de 24 horas no pueden usarse para la prueba de catalasa.
