Prueba de fermentación de carbohidratos en bacterias para descubrir su capacidad para fermentar carbohidratos

Prueba de fermentación de carbohidratos en bacterias para descubrir su capacidad de fermentar carbohidratos.

Principio:

Algunas bacterias tienen la capacidad de fermentar carbohidratos, particularmente azúcares. Entre ellas, cada bacteria puede fermentar solo algunos de los azúcares, mientras que no puede fermentar los otros.

Así, los azúcares, que las bacterias pueden fermentar, y los azúcares, que no puede ser la característica de las bacterias.

La prueba de fermentación de carbohidratos se realiza para probar, por separado, la capacidad de las bacterias para fermentar los azúcares como la glucosa, sacarosa, lactosa, maltosa y xilosa, así como sus derivados alcohólicos como aesculina, salicina, adonitol, dulcitol y sorbitol. Si las bacterias pueden fermentar un azúcar o un derivado de azúcar, se produce ácido, lo que reduce el pH cambiando el color del bromocresol púrpura de púrpura a amarillo.

Además, si se trata de una 'bacteria aerogénica', tanto el ácido como el gas (C02) se producen, mientras que si se trata de bacterias anaerogénicas, solo se produce ácido sin gas. La producción de gas se indica por su acumulación como una burbuja en un tubo de Durham invertido (un tubo de ensayo en miniatura).

En la prueba de fermentación de carbohidratos, las bacterias de prueba se cultivan en un medio de caldo que contiene uno de los azúcares o derivados de azúcar y bromocresol púrpura. Un tubo de Durham invertido se mantiene sumergido en él.

Si la bacteria "tiene la capacidad de fermentar el azúcar o el derivado del azúcar, el color del caldo cambia de púrpura a amarillo. Si la acumulación de gas se ve como una burbuja en el tubo de Durham, es una bacteria acrogénica, mientras que si no se observa acumulación de gas, es una bacteria anaerogénica.

Materiales necesarios:

Tubos de ensayo, tubos Durham, matraz cónico, tapones de algodón, bucle de inoculación, autoclave, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente para incubar, caldo de carbohidratos (caldo que contiene el azúcar específico o derivados del azúcar como glucosa, sacarosa, lactosa, maltosa, xilosa, aesculina, salicina, adonitol, dulcitol, sorbitol, etc.), colonias aisladas o cultivos puros de bacterias.

Procedimiento:

1. Los ingredientes del medio de caldo de carbohidratos (que contiene los carbohidratos requeridos y el púrpura de bromocresol como componentes principales) o su polvo ya preparado requerido para 100 ml del caldo se pesan y se disuelven en 100 ml de agua destilada en un matraz cónico de 250 ml. agitando y girando (Figura 7.8).

2. Su pH se determina usando un papel de pH o un medidor de pH y se ajusta a 6.8 usando 0.1N HC1 si es más o usando 0.1N NaOH si es menos. El matraz se calienta, si es necesario, para disolver los ingredientes por completo.

3. El caldo se distribuye en cinco tubos de ensayo (aproximadamente 10 ml cada uno).

4. Un tubo Durham se coloca en estado invertido en el caldo de cada tubo de ensayo. Los tubos Durham contienen aire en ellos y flotan. Durante la esterilización, el vapor caliente desplaza este aire, debido a que se sumergen en el caldo. Por lo tanto, no es necesario eliminar el aire de los tubos Durham llenándolos con el caldo antes de la esterilización para mantenerlos sumergidos en el caldo.

5. Los tubos de ensayo están tapados con algodón, cubiertos con papel artesanal y atados con hilo o banda de goma.

6. Los tubos de caldo se esterilizan a 121 ° C (15 psi de presión) durante 15 minutos en un autoclave. Alternativamente, se esterilizan 90 ml del medio basal (medio sin el carbohidrato) en el autoclave y, después de enfriar, se agregan 10 ml de la solución de carbohidrato (10%) esterilizada por filtración con membrana. Esto es particularmente esencial para los carbohidratos sensibles al calor, que sufren degradación durante la esterilización por calor.

7. Los tubos de caldo se dejan enfriar a temperatura ambiente.

8. Las bacterias de prueba se inoculan asépticamente, preferiblemente en una cámara de flujo laminar, en el caldo con la ayuda de un bucle de inoculación esterilizado sobre una llama Bunsen. El bucle se esteriliza después de cada inoculación.

9. Los tubos de caldo inoculados se incuban a 37 ° C durante 24 horas en una incubadora.

Observaciones:

1. El color del caldo cambia a amarillo y el gas se acumula en el tubo de Durham: fermentativo para los carbohidratos y acrogénico.

2. El color del caldo cambia a amarillo, pero no se acumula gas en el tubo de Durham: fermentativo para los carbohidratos y anaerogénico.

3. El color del caldo no cambia: no fermentativo para los carbohidratos.